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冷凍組織及切片的準(zhǔn)備

發(fā)布時(shí)間： 2023-04-21　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1315次

材料與儀器
1、新鮮的組織
2、丙酮蒸餾水干冰磷酸鹽緩沖液（PBS) Tek OCT 組織復(fù)合物
3、封閉容器燒杯恒冷裝置解剖工具平盤(pán) 組織模子載玻片刀片
步驟
一、材料

1. 緩沖液、溶液和試劑

丙酮

蒸餾水

干冰

磷酸鹽緩沖液（PBS)

Tek OCT 組織復(fù)合物（Sakura FinetekUSA，Torrance，CA)

2. 特殊設(shè)備

封閉容器

燒杯

恒冷裝置

解剖工具

平盤(pán)

可以削去的一次性組織模子（Pelco International，Redding，CA)

普通的無(wú)粘片劑的載玻片

Sakura 刀片（IMEB，SanMarcos，CA)

3. 細(xì)胞和組織

新鮮的組織（見(jiàn)二、方法中的（2））

二、方法

1. 冷凍組織的準(zhǔn)備

(1) 蓋上盛有包埋介質(zhì)的模子（推薦使用 Tek O C T 組織復(fù)合物），準(zhǔn)備干冰-丙酮浴(在燒杯中簡(jiǎn)單混合干冰和丙酮）。

(2) 處死動(dòng)物并取出目的組織與包埋介質(zhì)混合。

(3) 放組織于冷模子底上。為了便于利用恒冷裝置，反向放目的切面于冷模子底上。

(4) 將冷模子的底部放于干冰-丙酮浴的表面，這樣樣品將在 3~4 min 內(nèi)逐漸冷卻。當(dāng)品冷凍后將呈現(xiàn)白色。在冷凍時(shí)不要將模子掉入丙酮中。

(5) 從模子中移去組織，放于-80°C 直到切片。如果組織樣品放置時(shí)間較長(zhǎng)，將其放盛有冷的蒸餾水的密封容器中以保持濕度。

2. 切片及保存

(1) 取冷凍的樣品置于含 O C T 復(fù)合物的低溫冷箱中，采用標(biāo)準(zhǔn)的冷凍組織切片法。

(2) 讓樣品與冷箱中溫度（-25~-20°C) 平衡 15~20 min。如果樣品在切片時(shí)組織塊太冷，平衡時(shí)間可以適度延長(zhǎng)。

(3) 將準(zhǔn)備用于 LCM 的切片（厚度 1~5um) 放于普通的無(wú)粘片劑的載破片上。如果組織粘于載玻片上太緊，可能不利于后續(xù)的 LCM 操作。

(4) 放置好后，立即放到干冰上。如果當(dāng)天做 LCM，片子應(yīng)當(dāng)放在干冰上。否則，應(yīng)儲(chǔ)存于-80°C。

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