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RAW264.7細胞轉染操作步驟在已經(jīng)發(fā)表文章中的經(jīng)驗分享介紹

發(fā)布時間： 2021-07-20　　點擊次數(shù)： 2183次

石河子大學動物科學與技術學院，在2021年發(fā)表文章到Frontiers in Immunology的學術期刊中科研者使用美國zeta life轉染試劑，高效率轉染質粒DNA和siRNA到RAW264.7細胞，具體轉染RAW264.7細胞方法經(jīng)驗如下：（注意：本文轉染實驗中使用的細胞數(shù)量、試劑用量和操作方法不適用于傳統(tǒng)lipo3000轉染試劑或類似產(chǎn)品）

All plasmids and siRNAs (20 uM/uL) were transfected using the Advanced DNA RNA Transfection Reagent™ (ZETA LIFE，USA) according to the manufacturer’s protocol. Briefly,RAW264.7 cells were planted on the cell culture plate one day in advance, the cell confluence degree was up to 60 – 80 % at the time of transfection, plasmid or siRNA was directly mixed with transfection reagent according to 1:1 relationship, then mixed by blowing into a pipette for 10 – 15 times. Following incubation at room temperature for 10-15 minutes, the complex was added to the cell culture plates, mix 148 gently, and incubated in the CO2 incubator for 24h. All the siRNAs were designed by Gene Pharma transfection efficiency was measured using 150 qRT-PCR.
Zeta Life介紹：
美國 Zeta Life 公司成立于 1989 年，是國際無血清細胞培養(yǎng)基 DMEM/F12 主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無血清細胞培養(yǎng)基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類型哺乳動物細胞的無血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗；也是目前世界胎牛血清、無血清培養(yǎng)基最大的 OEM 供應商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫(yī)師檢驗證明及品質測試報告；ZETA LIFE 血清在 100 級的無菌間采用全自動方式制造生產(chǎn)，具有良好的可再現(xiàn)性及可追溯性。 2018 年 Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑，此技術成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關鍵技術之一。

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